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多肽类或蛋白质◎供试品经过酸水解处理，得到游离氨基酸，在弱碱性条件下，用PITC（异◤硫氰酸苯酯）衍生剂进行柱前衍生，赋予氨基酸以疏水结构和吸收基团，然后使用高效液相在色谱柱上进行分离，并在254nm波长下进行检测。消光系数选取回收率较好的6种氨基酸（Asp，Glu，Ala，Ile，Leu，Lys）进行消光系数E的计算。

蛋白质中未形成二硫键的游离巯基，有可能在蛋白质分子内或分子间氧化错配形成非天然的二硫键，从而可能影响蛋白的稳定性与生物学功能。运用Measure-IT^TM巯基检测试剂盒特异性地标记多肽或蛋白质类样品中的游离巯ξ　基，之后通过检测荧光信号强度来反映样品中游离巯基的含量，最终通过标准曲线计算样品中游离巯基的相对含量。

Edman降解法是异硫氰酸苯酯(PITC)在弱碱条件下与蛋白质N端氨基偶联生成苯氨基硫甲酰肽（PTC-蛋白质/多肽），然后在无水强酸条件下，N-端的第一个残基从完整的多肽或蛋白链上以2-苯氨基噻』唑啉酮(ATZ-AA)的形式裂解下来，之后在稀∏酸条件下，ATZ-AA转化为更加稳定的苯基乙内酰硫N脲衍生物，即 PTH-氨基酸，生成的PTH-AA输送至高效液相↙色谱中进行在线分析，剩下的多肽蛋白样品可反复进行上述处理，依次生成各种PTH-AA，经液相色谱柱分离可以确定被测多肽或蛋白质N端的氨基酸排列顺序。

结论：样品的N端序列为NH2-Met-His-Ser-His-Arg-Asp-Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala，即MHSHRDFQPVLHLVA，且与N端理论氨基酸排列序列一致。

分子排阻色谱技术与多角度激光光散射技术联用（SEC-MALS，Size Exclusion Chromatography with Multi-angle Light Scattering）是将SEC能够有效分析低分子碎片、单体与高分子聚体的含◇量，联用MALS分析经SEC分离的各分子大小异质体的分子量↑，以获得各成分的分子量大小信息。